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PacBio建库测序

上游建库 PacBio测序的上游建库过程相对复杂，主要包括DNA片段化、末端修复、加接头、大小筛选以及文库扩增等步骤。DNA片段化：为了获得适合PacBio测序的DNA片段，通常需要使用特定的酶或机械方法将基因组DNA切割成较小的片段。这些片段的长度和分布对于后续的测序效率和准确性至关重要。

G.PacBio的优势：1，PacBio可以直接测碱基被修饰的状态。如遇见甲基化的碱基，合成速度会放慢，光谱特征会改变。2，建库过程无需PCR，由于PCR过程中AT碱基比GC碱基复制速度快，会导致最终AT的含量比较高，影响测序质量。GC bias少。3，测序速度快：测序速度取决于酶反应速度，一秒3个碱基。

且支持同时操作4张芯片，最大数据量可达360G，足以完成4个人全基因组的测序。

Pacbio的GC bias很小。例如，在PCR过程中，如果模板的GC含量比较高，那么PCR的效率就会比较低。反之，AT含量高，PCR的效率就会高，而传统的建库过程中，PCR的过程比较多，导致的结果就是GC含量高的reads数就会比较差。

pacbio sequel II升级后单个芯片数据通量是原来的8倍 Pacbio文库构建的模板是哑铃形状，哑铃形状的文库有一个好处，它整个分子实际上是一个圆环。在测序的过程中它可以周而复始地进行测序，这不仅有利于发挥PacBio的长读长的优势，同时有利于多个pass矫正随机错误率。

Illumina测序和PacBio测序的主要不同点如下：测序技术：Illumina测序：使用边合成边测序的方法，通过在芯片上固定DNA片段，然后通过桥式PCR扩增，再进行测序。PacBio测序：采用单分子实时测序技术，捕捉单个DNA聚合酶复合物在零模波导孔内连续合成单链DNA的过程。